Tha venom nathair a’ toirt a-steach enzyman a bhios a’ hydrolyze bannan eistear carboxyl.Is e na fo-stratan airson hydrolysis fospholipids, acetylcholine agus acetate aromatic.Tha trì seòrsaichean anns na h-enzyman sin: phospholipase, acetylcholinesterase agus esterase aromatic.Faodaidh arginine esterase ann an puinnsean nathair cuideachd hydrolyze arginine synthetigeach no lysine, ach bidh e gu ìre mhòr a ’hydrolyzes bannan peptide pròtain ann an nàdar, agus mar sin buinidh e do protease.Chan eil na h-enzyman a tha air an deasbad an seo ag obair ach air fo-stratan eistear agus chan urrainn dhaibh obrachadh air ceangal peptide sam bith.Am measg nan enzyman sin, tha gnìomhan bith-eòlasach acetylcholinesterase agus phospholipase nas cudromaiche agus chaidh an làn sgrùdadh.Tha gnìomhachd làidir esterase cùbhraidh aig cuid de phuinnseanan nathair, a dh’ fhaodas ester p-nitrophenyl ethyl a hydrolyze, a - no P-naphthalene acetate agus indole ethyl ester.Chan eil fios fhathast a bheil an gnìomhachd seo air a thoirt a-mach le enzyme neo-eisimeileach no taobh-buaidh aithnichte de carboxylesterase, gun luaidh air a chudromachd bith-eòlasach.Nuair a chaidh venom Agkistrodon halys Japonicus ath-fhreagairt le p-nitrophenyl ethyl ester agus indole ethyl ester, cha deach na hydrolysates de p-nitrophenol agus indole phenol a lorg;Air an làimh eile, ma dhèiligeas na h-eathraichean sin le venom nathair fo-ghnè cobra Zhoushan agus puinnsean nathair Bungarus multicinctus, thèid an uisgeachadh gu sgiobalta.Tha fios gu bheil gnìomhachd cholinesterase làidir aig na puinnseanan cobra sin, a dh’ fhaodadh a bhith an urra ri hydrolysis de na fo-stratan gu h-àrd.Gu dearbh, tha Mclean et al.(1971) gum faod mòran de phuinnsean nathair a bhuineas don teaghlach Cobra hydrolyze indole ethyl ester, naphthalene ethyl ester agus butyl naphthalene ester.Tha na puinnseanan nathair seo a’ tighinn bho: cobra, cobra le amhaich dhubh, cobra dubh-bhiorach, cobra òir, cobra Èiphiteach, cobra rìgh, cobra mamba òir, mamba dubh agus mamba le mullach geal (tha D. aw fhathast eòlach air nathair-lobhra rhombola an ear.
Faodaidh puinnsean na nathair methyl indole ethyl ester a hydrolyze, is e sin an t-substrate airson gnìomhachd cholinesterase ann an serum a dhearbhadh, ach chan eil an puinnsean nathair seo a ’nochdadh gnìomhachd cholinesterase.Tha seo a 'sealltainn gu bheil esterase neo-aithnichte ann an cobra venom, a tha eadar-dhealaichte bho cholinesterase.Gus nàdar an einnsein seo a thuigsinn, tha feum air tuilleadh obair dealachaidh.
1, Phospholipase A2
(I) Sealladh farsaing
Tha phospholipase na einnsein a dh'fhaodas glyceryl phosphate a uisgeachadh.Tha 5 seòrsa de phospholipase ann an nàdar, is iad sin phospholipase A2 agus phospholipase
A. , phospholipase B, phospholipase C agus phospholipase D. Ann am puinnsean na nathair tha phospholipase A2 (PLA2 sa mhòr-chuid), tha fospholipase B ann am beagan phuinnseanan nathair, agus lorgar fospholipase B sa mhòr-chuid ann am figheagan bheathaichean agus bacteria.Tha Fig. 3-11-4 a' sealltainn làrach gnìomh nam fospholipas sin air hydrolysis substrate.
Am measg phospholipases, chaidh barrachd sgrùdadh a dhèanamh air PLA2.Is dòcha gur e seo an enzym as motha a chaidh a sgrùdadh ann an venom nathair.Is e an t-substrate aige an ceangal eistear air an dàrna suidheachadh de Sn-3-glycerophosphate.Lorgar an enzyme seo gu farsaing ann am puinnsean nathair, puinnsean seillean, puinnsean scorpion agus stuthan beathach, agus tha PLA2 pailt ann an ceithir puinnseanan nathair teaghlaich.Leis gu bheil an enzyme seo a’ briseadh cheallan fala dearga agus ag adhbhrachadh hemolysis, canar “hemolysin” ris cuideachd.Bidh cuid cuideachd a 'gairm PLA2 lecithinase hemolytic.
Lorg Ludeeke an-toiseach gum faod puinnsean nathair todhar hemolytic a dhèanamh le bhith ag obair air lecithin tro enzyman.Nas fhaide air adhart, chaidh Delezenne et al.dearbhadh, nuair a bhios puinnsean cobra ag obair air serum each no buidheag, gu bheil e na stuth hemolytic.Tha fios a-nis gum faod PLA2 obrachadh gu dìreach air fospholipids an membran erythrocyte, a’ sgrios structar an membran erythrocyte agus ag adhbhrachadh hemolysis dìreach;Faodaidh e cuideachd a bhith ag obair air serum no lecithin a bharrachd gus lecithin hemolytic a thoirt gu buil, a bhios ag obair air ceallan fala dearga gus hemolysis neo-dhìreach a thoirt gu buil.Ged a tha PLA2 pailt anns na ceithir teaghlaichean de phuinnsean nathair, tha susbaint enzymes ann an grunn phuinnsean nathair beagan eadar-dhealaichte.nathair-chaorach (C
Cha do sheall puinnsean nathair ach gnìomhachd lag PLA2.Tha Clàr 3-11-11 a’ sealltainn coimeas gnìomhachd PLA2 de 10 prìomh phuinnsean de nathraichean puinnseanta ann an Sìona.
Clàr 3-11-11 Coimeas de ghnìomhachd phospholipase VIII de 10 puinnsean nathair ann an Sìona
Nathair nathair
Sgaoileadh saill
searbhag alafatach,
Cjumol/mg)
Gnìomh hemolytic CHU50 / ^ g * ml)
Nathair nathair
Leig às searbhagan geir
(^raol/mg)
Gnìomh hemolytic "(HU50 / ftg * 1111)
Najanaja atra
9. 62
aon-deug
Micracephal ophis
còig puingean aon neoni
caolais
8. 68
dà mhìle agus ochd ceud
gracilis
V, acutus
7. 56
* * #
Ophiophagus Hannah
trì puingean ochd dhà
ceud agus dà fhichead
Bnugarus fascatus
7,56
dà cheud agus ceithir fichead
B. ioma-chonctus
aon phuing naoi sia
dà cheud agus ceithir fichead
Viper agus russelli
seachd puingean neoni trì
T, mucrosquamatus
aon phuing ochd còig
Siamensis
T. stejnegeri
0. 97
（2） Dealachadh agus glanadh
Tha susbaint PLA2 ann an venom nathair mòr, agus tha e seasmhach airson teasachadh, searbhag, alkali agus denaturant, gus am bi e furasta PLA2 a ghlanadh agus a sgaradh.Is e an dòigh cumanta sìoladh gel a dhèanamh air a’ phuinnsean amh, an uairsin cromatagrafaidheachd iomlaid ian a dhèanamh, agus faodar an ath cheum ath-aithris.Bu chòir a thoirt fa-near nach bu chòir tiormachadh reothadh PLA2 às deidh cromatagrafaidheachd iomlaid-ion a bhith ag adhbhrachadh cruinneachadh, leis gu bheil am pròiseas reothadh-tioram gu tric a’ meudachadh neart ionic san t-siostam, rud a tha na fheart cudromach ag adhbhrachadh cruinneachadh PLA2.A bharrachd air na dòighean coitcheann gu h-àrd, chaidh gabhail ris na dòighean a leanas cuideachd: ① Wells et al.② Chaidh an analogue substrate de PLA2 a chleachdadh mar ligand airson cromatagrafaidheachd dàimh.Faodaidh an ligand seo ceangal ri PLA2 ann an puinnsean nathair le Ca2+.Tha EDTA air a chleachdadh sa mhòr-chuid mar eluent.Às deidh Ca2 + a thoirt air falbh, lùghdaichidh an dàimh eadar PLA2 agus ligand, agus faodar a sgaradh bho ligand.Bidh cuid eile a’ cleachdadh fuasgladh organach 30% no 6mol/L urea mar eluent.③ Chaidh cromatagrafaidheachd hydrophobic a dhèanamh le PheiiylSephar0SeCL-4B gus lorg PLA2 ann an cardiotoxin a thoirt air falbh.④ Chaidh antibody anti PLA2 a chleachdadh mar ligand gus cromatagrafaidheachd dàimh a dhèanamh air PLA2.
Gu ruige seo, chaidh àireamh mhòr de phuinnsean nathair PLAZ a ghlanadh.Tu et al.(1977) liosta PLA2 air a ghlanadh bho phuinnsean nathair ro 1975. Anns na bliadhnachan mu dheireadh, chaidh àireamh mhòr de artaigilean mu sgaradh agus glanadh PLA2 aithris gach bliadhna.An seo, bidh sinn a’ cuimseachadh air dealachadh agus glanadh PLA le sgoilearan Sìneach.
Chen Yuancong et al.(1981) dealachadh trì gnèithean PLA2 bho phuinnsean Agkistrodon halys Pallas ann an Zhejiang, a dh’ fhaodar a roinn ann an searbhagach, neodrach agus alcaileach PLA2 a rèir na puingean isoelectric aca.A rèir cho puinnseanta ‘s a tha e, tha PLA2 neodrach nas puinnseanta, a chaidh a chomharrachadh mar presynaptic neurotoxin Agkistrodotoxin.Chan eil alkaline PLA2 cho puinnseanta, agus cha mhòr nach eil puinnseanta aig PLA2 searbhagach.Wu Xiangfu et al.(1984) coimeas eadar feartan trì PLA2n, a 'gabhail a-steach cuideam molecular, co-dhèanamh aminoideach, N-terminal, puing isoelectric, seasmhachd teirmeach, gnìomhachd enzyme, puinnseanta agus gnìomhachd hemolytic.Sheall na co-dhùnaidhean gu robh cuideam moileciuil coltach riutha agus seasmhachd teirmeach, ach gu robh eadar-dhealachaidhean mòra aca ann an taobhan eile.A thaobh gnìomhachd enzyme, bha gnìomhachd enzyme searbhagach nas àirde na gnìomhachd enzyme alcalin;B ’e a’ bhuaidh hemolytic aig enzyme alcalin air ceallan fala dearga radan an fheadhainn as làidire, air a leantainn le enzyme neodrach, agus enzyme searbhagach cha mhòr hemolyzed.Mar sin, thathas a’ dèanamh tuairmeas gu bheil buaidh hemolytic PLAZ co-cheangailte ri cosgais moileciuil PLA2.Zhang Jingkang et al.(1981) air criostalan Agkistrodotoxin a dhèanamh.Tu Guangliang et al.(1983) gun robh PLA puinnseanta le puing isoelectric de 7. 6 air a sgaradh agus air a ghlanadh bho phuinnsean Vipera rotundus bho Fujian, agus na feartan fiosaigeach agus ceimigeach aige, co-dhèanamh aminoideach agus an t-sreath de 22 fuigheall aminoideach aig an N. - Terminal air a cho-dhùnadh.Li Yuesheng et al.(1985) dealachadh agus ghlan PLA2 eile bho phuinnsean Viper rotundus ann am Fujian.Is e fo-aonad an PLA2 * 13 800, is e am puing isoelectric 10.4, agus is e an gnìomhachd sònraichte 35 / xnioI / miri mg. LD5 air a stealladh gu taobh a-staigh na luchainn.Tha e 0.5 ± 0.12mg / kg.Tha buaidhean follaiseach anticoagulant agus hemolytic aig an enzyme seo.Tha am moileciuil puinnseanta PLA2 air a dhèanamh suas de 123 fuigheall de 18 seòrsa de amino-aigéid.Tha am moileciuil beairteach ann an cysteine (14), searbhag aspartic (14) agus glycine (12), ach chan eil ann ach aon methionine, agus tha an N-terminal aige na fhuigheall serine.An coimeas ri PLA2 iomallach le Tuguang, tha an cuideam moileciuil agus an àireamh de fhuigheall aminoideach den dà isoenzymes glè choltach, agus tha an co-dhèanamh aminoideach glè choltach cuideachd, ach tha an àireamh de dh’ searbhag aspartic agus fuigheall proline beagan eadar-dhealaichte.Ann an venom nathair cobra rìgh Guangxi tha PLA2 beairteach.Shu Yuyan et al.(1989) dealachadh PLA2 bhon phuinnsean, aig a bheil gnìomhachd sònraichte 3.6 tursan nas àirde na an venom tùsail, cuideam moileciuil de 13000, co-dhèanamh de 122 fuigheall aminoideach, puing isoelectric de 8.9, agus deagh sheasmhachd teirmeach.Bhon sgrùdadh microsgop dealanach air buaidh PLA2 bunaiteach air ceallan fala dearga, chìthear gu bheil buaidh follaiseach aige air membran cealla fola dearga daonna, ach chan eil buaidh follaiseach aige air ceallan fola dearga gobhar.Tha buaidh dàil follaiseach aig an PLA2 seo air astar electrophoretic cheallan fala dearga ann an daoine, gobhair, coineanaich agus mucan-gini.Chen et al.Faodaidh an enzyme seo casg a chuir air cruinneachadh platelet air adhbhrachadh le ADP, collagen agus searbhag sodium arachidonic.Nuair a tha dùmhlachd PLA2 10 / xg / ml ~ lOOjug / ml, tha casg air cruinneachadh platelet gu tur.Nam biodh truinnsearan nighe air an cleachdadh mar stuthan, cha b’ urrainn dha PLA2 bacadh a chur air cruinneachadh aig dùmhlachd 20Mg/ml.Tha aspirin na neach-dìon de cyclooxygenase, a dh’ fhaodadh bacadh a chuir air buaidh PLA2 air truinnsearan.Faodaidh PLA2 casg a chuir air cruinneachadh platelet le bhith a’ uisgeachadh searbhag arachidonic gus thromboxane A2 a cho-chur.Chaidh co-chòrdadh fuasglaidh PLA2 a chaidh a thoirt a-mach le Agkistrodon halys Pallas venom ann an Roinn Zhejiang a sgrùdadh le dichroism cruinn, fluorescence agus in-ghabhail UV.Sheall toraidhean deuchainneach gu robh co-chòrdadh prìomh shlabhraidh an enzyme seo coltach ris an aon sheòrsa enzyme bho ghnèithean agus ginealaichean eile, bha deagh sheasamh teas aig co-chòrdadh cnàimhneach, agus bha an atharrachadh structarail ann an àrainneachd searbhagach comasach air ais.Chan eil an cothlamadh de activator Ca2 + agus enzyme a’ toirt buaidh air àrainneachd fuigheall tryptophan, fhad ‘s a tha an neach-dìon Zn2 + a’ dèanamh a chaochladh.Tha an dòigh anns a bheil luach pH fuasglaidh a 'toirt buaidh air gnìomhachd enzyme eadar-dhealaichte bho na h-ath-bheachdan gu h-àrd.
Ann am pròiseas purchaidh PLA2 de phuinnsean nathair, is e iongantas follaiseach gu bheil dà stùc no barrachd PLA2 elution ann am puinnsean nathair.Faodar an iongantas seo a mhìneachadh mar a leanas: ① air sgàth gu bheil isozymes ann;② Tha aon sheòrsa PLA2 air a phoileachadh ann an grunn mheasgachaidhean PLA2 le diofar cuideaman moileciuil, a’ mhòr-chuid dhiubh anns an raon 9 000 ~ 40 000;③ Tha an cothlamadh de PLA2 agus co-phàirtean puinnsean nathair eile a’ dèanamh duilgheadas do PLA2;④ Leis gu bheil an ceangal amide ann am PLA2 air a uisgeachadh, bidh an cosgais ag atharrachadh.① Agus tha ② cumanta, le dìreach beagan eisgeachdan, leithid PLA2 ann an puinnsean nathair CrWa/w
Tha dà shuidheachadh ann: ① agus ②.Chaidh an treas suidheachadh a lorg ann am PLA2 ann am puinnsean nan nathraichean a leanas: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a^>er, Palestinian viper, sand viper, agus uamhasach rattlesnake km.
Mar thoradh air cùis ④ bidh astar imrich PLA2 ag atharrachadh rè electrophoresis, ach chan eil an co-dhèanamh aminoideach ag atharrachadh.Faodar peptides a bhriseadh le hydrolysis, ach sa chumantas tha iad fhathast ceangailte ri chèile le bannan disulfide.Ann am puinnsean an t-sloc an ear tha dà sheòrsa PLA2, ris an canar seòrsa a agus seòrsa p PLA2 fa leth.Chan eil an eadar-dhealachadh eadar an dà sheòrsa PLA2 seo ach aon aminoideach, is e sin, tha searbhag glutamic an àite glutamine ann an aon mholacile PLA2 anns a’ mholacile PLA2 eile.Ged nach eil an dearbh adhbhar airson an eadar-dhealachaidh seo soilleir, sa chumantas thathas a’ creidsinn gu bheil e co-cheangailte ri dì-mhilleadh PLA2.Ma thèid PLA2 ann an venom viper Palestine a chumail blàth leis a’ phuinnsean amh, bidh na buidhnean deireannach anns na moileciuilean enzyme aca a’ fàs nas motha na bha iad roimhe.Bho C PLA2 air a sgaradh bho phuinnsean nathair tha dà N-terminal eadar-dhealaichte, agus is e an cuideam moileciuil aige 30000. Dh’ fhaodadh an t-iongantas seo a bhith air adhbhrachadh leis an dimer neo-chunbhalach de PLA2, a tha coltach ris an dimer co-chothromach a chruthaich PLA2 ann an venom an nathair rattleback daoimean an ear. agus nathair-ghritheach daoimean an iar.Tha an cobra Àisianach air a dhèanamh suas de dh'iomadh fo-ghnè, cuid dhiubh nach eil gu math cinnteach ann an seòrsachadh.Mar eisimpleir, tha an rud ris an canar fo-ghnè Cobra Outer Caspian a-nis aithnichte
Bu chòir a thoirt air sgàth an Outer Caspian Sea Cobra.Leis gu bheil mòran fo-ghnèithean ann agus gu bheil iad measgaichte ri chèile, tha cothlamadh puinnsean nathair ag atharrachadh gu mòr air sgàth diofar stòran, agus tha susbaint isozymes PLA2 cuideachd àrd.Mar eisimpleir, puinnsean cobra
Chaidh co-dhiù 9 seòrsa de isozymes PLA2 de ghnè r^ll a lorg a-steach, agus chaidh 7 seòrsa de isozymes PLA2 a lorg ann an venom fo-ghnè cobra Caspian.Durkin et al.(1981) rinn iad sgrùdadh air susbaint PLA2 agus an àireamh de isozymes ann an diofar phuinnsean nathair, a’ toirt a-steach 18 puinnsean cobra, 3 venoms mamba, 5 venoms viper, 16 venoms nathrach-ghritheach agus 3 puinnseanan nathair-mara.San fharsaingeachd, tha gnìomhachd PLA2 de phuinnsean cobra àrd, le mòran isozymes.Tha gnìomhachd PLA2 agus iszymes de phuinnsean viper meadhanach.Tha gnìomhachd PLA2 de phuinnsean mamba agus puinnsean an t-sluic gu math ìosal no gun ghnìomhachd PLA2.Tha gnìomhachd PLA2 de phuinnsean nathair mara cuideachd ìosal.
Anns na beagan bhliadhnaichean a dh ’fhalbh, cha deach aithris gu bheil PLA2 ann an puinnsean nathair ann an cruth dimer gnìomhach, leithid an lus nathair rhombophora an ear (tha C. venom nathair a’ toirt a-steach seòrsa a agus seòrsa P PLA2, agus tha an dà chuid air an dèanamh suas de dhà fho-aonad co-ionann. , agus chan eil ann ach dimerase
Gnìomhachd.Shen et al.mhol e cuideachd nach e dìreach an dimer de PLA2 de phuinnsean nathair an cruth gnìomhach den enzyme.Tha an sgrùdadh air structar spàsail cuideachd a’ dearbhadh gu bheil PLA2 de nathair-gràine daoimean an iar ann an cruth dimer.Measgachadh piscivorous
Tha dà PLA ^ Ei agus E2 eadar-dhealaichte de phuinnsean nathair, anns a bheil 仏 ann an cruth dimer, tha an dimer gnìomhach, agus tha am monomer dissociated aige neo-ghnìomhach.Lu Yinghua et al.(1980) tuilleadh sgrùdaidh air feartan fiosaigeach agus ceimigeach agus cineataigs freagairt E. Jayanthi et al.(1989) dealachadh PLA2 bunaiteach (VRVPL-V) bhon phuinnsean viper.Is e cuideam moileciuil an monomer PLA2 10000, aig a bheil buaidhean marbhtach, anticoagulant agus edema.Faodaidh an enzyme polymers a dhèanamh air polymers le cuideaman moileciuil eadar-dhealaichte fo chumha PH 4.8, agus bidh an ìre de polymerization agus cuideam moileciuil polymers ag àrdachadh le àrdachadh teothachd.Is e cuideam moileciuil an polymer a chaidh a chruthachadh aig 96 ° C 53 100, agus tha gnìomhachd PLA2 an polymer seo ag àrdachadh le dhà
Ùine puist: Samhain-18-2022